Skip to content

Autoprzeciwciała przeciwko receptorowi IgE o wysokim powinowactwie jako przyczyna uwolnienia histaminy w przewlekłej pokrzywce ad

2 miesiące ago

496 words

Poziomy IgE w surowicy były mniejsze niż 1,0 IU na mililitr w Donor i 190 IU na mililitr w Dawcy 2, wskazując, że bazofile Dawcy były słabo uczulone endogennym IgE, a te z Dawcy 2 były zasadniczo w pełni uczulone. Leukocyty inkubowano przez 40 minut w buforze (zwykle 200 mikrolitrów) zawierającym dwukrotne (lub inne, jak wskazano) rozcieńczenie surowicy od pacjentów lub kontroli; frakcja surowicy IgG; kozie antyludzkie IgE (swoiste dla łańcucha ., Sigma, Poole, Zjednoczone Królestwo) w rozcieńczeniu, które zapewniło optymalne uwalnianie histaminy (1: 1000), o ile nie podano inaczej; Przeciwciało monoklonalne 6F77 przeciw-Fc.RI. konkurujące z IgE; 5 mikroMoli jonofor wapnia A23187 (Sigma) lub sam bufor. Jonofor wapnia był włączony do wszystkich eksperymentów jako nieimmunologiczny pozytywnie kontrolujący środek uwalniający histaminę. Uwalnianie histaminy mierzono za pomocą zautomatyzowanego testu fluorymetrycznego8 i wyrażano jako procent uwalnianej histaminy po odjęciu ilości spontanicznie uwolnionej histaminy i odpowiednich wartości ślepej surowicy. Spontaniczne uwalnianie stanowiło mniej niż 3 procent histaminy w każdej z próbek dawcy.
Pasywne uczulenie i dysocjacja IgE z bazofilów
Mieszane leukocyty zawieszono w buforze bez wapnia i uczulano biernie 10 .g IgE szpiczaka na mililitr (dar miejsca wiązania, Birmingham, Wielka Brytania) lub traktowano 10 mM kwasem mlekowym (pH 3,9) w celu dysocjacji IgE, jak opisano w innym miejscu6 9. Próbkę zawierającą w przybliżeniu dwie trzecie bazofilów wytworzonych z Dawcy biernie uczulono na szpiczaka IgE (komórki uczulone), a pozostałe komórki trzymano w samym buforze jako komórki kontrolne. Uczulone komórki dokładnie przemyto i podzielono na dwie równe części. Następnie IgE zdysocjowano z jednej alikwoty przez traktowanie kwasem mlekowym (komórki dysocjowane). Komórki z każdej grupy traktowanej przemyto i następnie prowokowano, jak opisano dla testu uwalniania histaminy. Bazofil z Dawcy 2 wytworzono podobnie, z tym wyjątkiem, że podwielokrotność komórek potraktowano kwasem mlekowym w celu usunięcia endogennego IgE (zdysocjowane komórki) przed biernym uczuleniem na szpiczaka IgE (komórki uczulone).
Izolacja IgG i neutralizacja aktywności uwalniającej histaminę
Frakcje IgG oddzielono od surowicy lub osocza za pomocą kolumny agarozowej z białkiem G (Mabtrap, Pharmacia, Milton Keynes, Wielka Brytania) zgodnie z instrukcjami producenta, z tym wyjątkiem, że roztwory wytworzono bez środka konserwującego i 2,5-krotnie podaną objętość buforu stosowany jako roztwór przemywający przed wymywaniem IgG. Eluaty zawierające IgG zostały zatężone za pomocą membran Amicon YM30 lub mikrokoncentratorów Centricon-30 (Amicon, Stonehouse, Wielka Brytania). Czystość IgG w końcowych roztworach została potwierdzona przez elektroforezę w żelu poliakryloamidowym z dodecylosiarczanem sodu z barwieniem błękitem Coomassie. Nie wykryto żadnego innego białka. Stężenia IgG w całych frakcjach surowicy i IgG mierzono za pomocą radialnej immunodyfuzji z zestawem (miejsce wiązania).
Próbki surowicy i frakcje IgG od pacjentów inkubowano w temperaturze 37 ° C przez 30 minut z różnymi stężeniami rozpuszczalnego pozakomórkowego fragmentu Fc.RI. (sFc.RI.) przed ich inkubacją z leukocytami z Dawcy 1, jak opisano powyżej.
[przypisy: inteligencja niższa niż przeciętna, kardiolog ciechanów, przeglądarka skierowan ]

0 thoughts on “Autoprzeciwciała przeciwko receptorowi IgE o wysokim powinowactwie jako przyczyna uwolnienia histaminy w przewlekłej pokrzywce ad”

  1. korzystnie działaja na zmiejszenie cukru, cholesterolu i wzmocnienie naczyń krwionosnych